(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北恩施445000)

摘要:目的觀察肉蓯蓉總苷( GCS )對(duì)SD大鼠腦缺血及再灌注損傷與腦組織興奮性氨基酸(EAA)的影響。方法將SD大鼠經(jīng)肉蓯蓉總苷處理后，建立大鼠腦缺血再灌注模型，觀察肉蓯蓉總苷對(duì)腦組織中天冬氨酸(Glu )、谷氨酸(Asp，r-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)含量的影響。結(jié)果肉蓯蓉總苷能夠降低SD大鼠腦缺血再灌注后腦織Glu的含量。結(jié)論肉蓯蓉總苷抗缺血性腦損傷的作用機(jī)制可能與其對(duì)抗腦缺血及再灌注后 EAA的升高有關(guān)。

關(guān)鍵詞:肉蓯蓉總苷;興奮性氨基酸;腦缺血;再灌注

近年來，興奮性氨基酸(EAA)和老年癡呆發(fā)病以及學(xué)習(xí)記憶的密切關(guān)系已引起重視。許多證據(jù)表明EAA的神經(jīng)毒J勝作用，尤其是異常升高的谷氨酸(Glu )在阿爾茨海默病(Alzheimer , disease , AD)的發(fā)生，發(fā)展過程中起著極為重要的作用，蓯而為老年癡呆防治藥物的研究開辟了新的途徑[1~3]。肉蓯蓉總苷( GCS )對(duì)小鼠腦缺氧有保護(hù)作用，對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶有促進(jìn)作用，對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，能有效地清除各種活性氧自由基和保護(hù)經(jīng)基(OH)引發(fā)的DNA氧化損傷等[4]。本課題采用高效液相色譜技術(shù)對(duì)肉蓯蓉總苷

對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦組織興奮性氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定，蓯而探討肉蓯蓉總苷改善腦功能的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物蓯蓉總苷，杏輝天力(杭州)藥業(yè)有限公司，批號(hào):20081516，用時(shí)生理鹽水配制。

1.2動(dòng)物SD鼠60只，體重(20. 0士1.9)g，雌雄各半，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3試劑與儀器谷氨酸(Glu )、天冬氨酸(Asp ) ,氨基丁酸(GABA),，一甘氨酸(Gly)標(biāo)準(zhǔn)品均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，純度99.9 %(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純;TG328A型電子分析天平、R E-S2型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、儀器包括GL-20A型高速冷凍離心機(jī)(湘儀總廠離心機(jī)廠)、LC-6A高效液相色譜儀和RF-530熒光檢測(cè)儀(日本島津)。

1.4動(dòng)物模型的建立SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(A組)、缺血模型對(duì)照組(B組)、缺血加肉蓯蓉總苷藥液組(C組)、缺血再灌注模型組(D組)、再灌注加肉蓯蓉總苷原方組(E組)。缺血加原方組和再灌注加原方組均腹腔注射(ip)肉蓯蓉總苷藥4. 0 g·kg-1’;假手術(shù)組、缺血模型組和再灌注模型組均ip等容量生理鹽水，連續(xù)給藥2d。大鼠連續(xù)灌胃2d后，第3天以線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型(缺血15 min，再灌注48 min)。10%水合氯醛(350 g/100 g)腹腔注射麻醉大鼠后，分離右頸總動(dòng)脈并剪一小口，將直徑0. 215mm國(guó)產(chǎn)尼龍線頭端燒成光滑柞狀(直徑0. 26~0. 3 mm)插人，以頸總動(dòng)脈分叉處計(jì)算進(jìn)線深度為(18. 0土0.5)mm，至大腦中動(dòng)脈起始部以完全阻斷血供。再灌注時(shí)外托尼龍線，即可恢復(fù)頸內(nèi)動(dòng)脈及大腦中動(dòng)脈的血液供應(yīng)。模型成功的標(biāo)志是大鼠出現(xiàn)右眼Homer征;提尾時(shí)左前肢內(nèi)收屈

曲;爬行時(shí)向左側(cè)傾倒或按逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)圈。假手術(shù)組除不插人線栓外，其他操作步驟同上[5~9];

1.5觀察指標(biāo)及方法大鼠經(jīng)再灌注48 min后，斷頭切取大腦皮層在冰浴下，按照40 g·L-1’比例，用濃度為0. 02 mol·L一’的鹽酸，制作腦組織勻漿，置于10 000 r·min-1’離心15min，取上清液，采用高效液相色譜法進(jìn)行分析。

1. 6   HPLC分析條件LC-6A高效液相色譜儀，Nova-pakCia(150 mm x4 mm,5 N,m)，流動(dòng)相:50 mmol·L-1’醋酸鈉:甲醇:THF(A,82:17:1)，流動(dòng)相:50 mmol·L-1’醋酸鈉:甲醇:THF ( B , 22: 77 : l)，流速:1 ml·min-1’，柱溫:27℃，檢測(cè)波長(zhǎng):425 nm，進(jìn)樣量:100µl，梯度條件見表1 [5]。

1.7統(tǒng)計(jì)分析各組數(shù)值用(x士:)表示，采用SPSS13. 0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行ANNOVA單因素方差分析，P<0.05和P<0. 01認(rèn)為有顯著性和高度顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組腦組織Glu含量比較表1顯示，缺血15 min后，B組腦組織Glu含量高于A組(P<0.05);C組織Glu含量低于B組(P<0.05)，與A組間差異無顯著性(P>0.05)。再灌注48 min后，D組腦組織Glu含量高于A組(P<0.05)，與B組比較差異無顯著性(P>0.05);E組腦組織Glu含量低于D組(P<0.05)，與A組比較差異無顯著性(P>0.05)

2. 2其他氨基酸在各組腦組織的含量比較表I顯T,I徐B組及D組腦組織Asp}GABA含量高于A組(P<0.05或P<0. 01)外，其他各組比較均無顯著性(P>0.05);各組腦組織Gly含量比較，差異均無顯著性(P>0.05)

3討論

興奮性氨基酸是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)。已有文獻(xiàn)報(bào)道表明，腦缺血再灌注時(shí)，能夠引發(fā)興奮性氨基酸在腦組織中的含量明顯增高。這是由于腦缺血再灌注時(shí)，腦組織中的神經(jīng)元去極化，神經(jīng)細(xì)胞攝取興奮性氨基酸的能力嚴(yán)重受損，蓯而使得細(xì)胞外興奮性氨基酸的含量明顯增高[11~13]

本研究結(jié)果顯示，肉蓯蓉總著能夠顯著降低大腦皮層興奮性氨基酸的含量。由此可得出如下結(jié)論:肉蓯蓉總苷對(duì)于急性局灶性腦缺血再灌注大鼠所引發(fā)的病理過程具有確切的干預(yù)作用，其作用機(jī)制之一是通過調(diào)節(jié)大腦皮層興奮性氨基酸含量來實(shí)現(xiàn)的。