湖北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院(武漢430071)

德國(guó)柏林洪堡大學(xué)莎麗特醫(yī)學(xué)院神經(jīng)科

廖維靖 楊萬(wàn)同  周云峰

摘要探討當(dāng)歸對(duì)大鼠腦缺血損傷是否具有保護(hù)作用。阻斷大鼠右頸總動(dòng)脈和大腦中動(dòng)脈90

min后恢復(fù)再灌，給予25%當(dāng)歸注射液7. 5 mL靜脈滴注6h。術(shù)后第8天用圖像處理技術(shù)測(cè)定腦梗死體積。結(jié)果顯示當(dāng)歸治療組梗死體積顯著小于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)當(dāng)歸具有縮小腦梗死體積的作用，其作用機(jī)制待深人研究闡明。

關(guān)鍵詞腦缺血 當(dāng)歸 腦梗死

 研究腦缺血損傷保護(hù)劑是國(guó)內(nèi)外一直關(guān)注的課題，有效且無(wú)副作用的神經(jīng)保護(hù)劑是中西醫(yī)共同追求的目標(biāo)。中醫(yī)活血化癖藥對(duì)腦缺血的保護(hù)作用引起西醫(yī)的興趣，活血化痕治則引起西方國(guó)家的重視。MEDLINE檢索迄今未見(jiàn)當(dāng)歸能否作為腦缺血損傷保護(hù)劑的系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。為探討當(dāng)歸對(duì)腦缺血的保護(hù)作用，作者在德國(guó)洪堡大學(xué)莎麗特醫(yī)學(xué)院進(jìn)行腦缺血損傷保護(hù)機(jī)制的合作研究時(shí)，在德方實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物缺血模型的基礎(chǔ)上試用當(dāng)歸治療，同期觀察MK-801的作用，旨在探討當(dāng)歸對(duì)腦缺血損傷是否具有保護(hù)作用，并為今后從活血化窟藥中篩選腦保護(hù)劑及確定單一有效成分奠定基礎(chǔ)。

1材料和方法

1. 1動(dòng)物造模:雄性Wistar大鼠32只，體重250-v300 g。所有動(dòng)物均進(jìn)行右頸總動(dòng)脈(Carotid common artery,CCA)和大腦中動(dòng)脈(Middle cerebral artery , MCA )短暫阻斷的手術(shù)，隨機(jī)分為2組。一組不進(jìn)行任何治療用作實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(13只);另一組采用當(dāng)歸治療(19只)。動(dòng)物在Halothane持續(xù)麻醉下置于加熱墊上，將體溫探頭插人直腸測(cè)體溫。切開(kāi)鼠尾，將塑料導(dǎo)管插人尾動(dòng)脈后固定，測(cè)量術(shù)中血壓。切開(kāi)頸部皮膚，暴露左頸靜脈，插人導(dǎo)管并固定。在背部皮膚穿一小孔將導(dǎo)管引出，放置備用。仔細(xì)分離肌肉暴露CCA用橡膠細(xì)管結(jié)扎。切開(kāi)頭顱右MCA體表投影區(qū)皮膚，分離肌肉。用顱鉆鉆孔后，小心刺破硬腦膜并剝離。用弧型絲鉤提起MCA，并用固定力量牽拉造成MCA短暫阻斷，持續(xù)90min。小心將MCA放回原處恢復(fù)再灌，縫合皮膚。松開(kāi)結(jié)扎CCA的橡膠管，縫合皮膚。術(shù)中測(cè)體溫、血壓、血糖、血氧、血二氧化碳分壓、血酸堿度等生理參數(shù)，體溫維持在(37士0.5)`C。

1. 2給藥:25%當(dāng)歸注射液，湖北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)分別為940614,970214和970924。將7. 5 mL當(dāng)歸注射液加人固定壓力注射泵，調(diào)定速度，6h滴注完畢。滴注中每2h測(cè)體溫。剪去暴露體表的導(dǎo)管，牢固結(jié)扎后膠布固定。

1. 3取材:術(shù)后第一天評(píng)定肢體功能，測(cè)體溫、血糖、血細(xì)胞壓積，其后每天測(cè)體溫，第8ti U C:冰相儲(chǔ)放侍處埋。一G U L'但伶相甲冠樸連續(xù)切片，片厚40 um。將每20片中的第1.2張貼于一張玻璃片。每腦約做20張玻片。切片干燥過(guò)夜，酸性復(fù)紅染色，梯度乙醇弱水，封片。采用德國(guó)Polaroid圖像處理系統(tǒng)(Sprint Scan 35 Plus)測(cè)量每張切片的面私(mmZ)。觀察有梗死的切片張數(shù)可計(jì)算出校死的長(zhǎng)度，算出梗死的體積，單位為mm3 01. 4統(tǒng)計(jì)處理:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(x士:)表示，轅人Excel 7. 0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

實(shí)驗(yàn)對(duì)照組13只動(dòng)物，1例因梗死灶出血體積顯著大而被剔除，1例因梗死灶體積小于6 mm3剔除。這2例可能是手術(shù)誤差所致。治療組動(dòng)物死亡5例，1例因梗死灶出血被剔除，1例也因體積小于6 mm“被剔除。統(tǒng)計(jì)分析時(shí)對(duì)照組實(shí)際例數(shù)是n只，治療組12只。940614批號(hào)動(dòng)物4只，970214批號(hào)7只，970924批號(hào)4只。術(shù)中、術(shù)后生理參數(shù)變化未見(jiàn)顯著性差異，術(shù)后第1.8天肢體功能未見(jiàn)顯著性差異。對(duì)照組、治療組腦梗死體積變化見(jiàn)表1。

結(jié)果顯示當(dāng)歸對(duì)腦缺血損傷具有保護(hù)作用。與MK-801縮小梗死的結(jié)果相比，當(dāng)歸優(yōu)于MK-801 o MK-801的資料將由德方發(fā)表在英文期刊。

3討論

測(cè)定梗死面/體積是觀察梗死大小最直接客觀的指標(biāo)，體積指標(biāo)較面積準(zhǔn)確，用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理更易做到精確量化。深人研究應(yīng)觀察功能、代謝指標(biāo)以全面反映梗死變化。采用缺血/再灌模型較完全阻斷血供的模型更能模擬人體發(fā)病的情況。術(shù)后第8天是梗死發(fā)展成最大的時(shí)間，且組織水腫消除，此時(shí)測(cè)定梗死體積最準(zhǔn)確。

近年研究認(rèn)為腦缺血損傷的病理生理機(jī)制是損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，即興奮性毒性、梗死周?chē)O化、炎癥和程序性細(xì)胞死亡4個(gè)過(guò)程[m鈣、谷氨酸、氧自由基、NO等涉及這些過(guò)程。中醫(yī)認(rèn)為缺血是察癥，其治則為化瘓，活血是化癖的前提。MEDLINE檢索迄今未見(jiàn)當(dāng)歸作腦保護(hù)劑的研究。本文結(jié)果首次顯示當(dāng)歸具有縮小腦梗死體積的作用。文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)歸能夠清除自由基川，本實(shí)驗(yàn)可能是當(dāng)歸清除自由基的作用結(jié)果。當(dāng)歸注射液的成分超過(guò)40種仁3J，當(dāng)歸成分之一的阿魏酸(ferulicacid)具有抗氧化損傷的作用C s7，本結(jié)果是否為阿魏酸的作用有待證實(shí)。

本實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，不同批號(hào)(次)的藥液縮小梗塞的差異較大，可能與中藥制劑質(zhì)量不穩(wěn)定有關(guān)，也可能是手術(shù)本身的原因。本實(shí)驗(yàn)所用劑量是通常文獻(xiàn)報(bào)告劑量的一半，這是依動(dòng)物實(shí)際體重、給藥方式及便利而定，并非最適劑量。一次給藥方法與傳統(tǒng)的每天給藥習(xí)慣不同，以便跟MK-801進(jìn)行比較，結(jié)果提示當(dāng)歸潛在的保護(hù)作用相當(dāng)大，同時(shí)說(shuō)明藥物療效不一定是治療時(shí)間越長(zhǎng)越好，劑量越大越好。